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BalbSeq DNA片段化模块为高通量测序平台文库构建配套试剂盒，用于文库构建前的大片段DNA片段化。模块利用时间依赖型酶促反应的原理，根据不同的作用时间将双链DNA随机切割成200～500bp的片段，所得片段为平末端双链DNA片段，5'端基团含有5'-P，3'端基团含有3'-OH，可直接进行后续的dA或adapter添加。通过BalbSeq DNA片段化模块对双链DNA随机的切割，表明本产品不具碱基偏好性，且不同类型切割DNA片段的测序覆盖率与机械切割一致。

• 无需特殊仪器设备，通过酶促反应简便快速的片段化双链DNA。
  
• 使用灵活，通过调整片段化时间，灵活调整DNA片段化长度。
  
• 反应高效，单个反应体系即可完成1ng～1μg DNA样本的片段化。

• 操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。
  
• 请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、EP管进行试验。
  
• 试验开始前，请清洁操作台，确保没有RNA酶和DNA的污染。
  
• 进行文库扩增前，请确保PCR仪已经调试好并处于稳定的状态。
  
• 试验前请仔细阅读说明书，如果需要暂停试验，或者无需立即进行下游试验。可根据说明书推荐将试验产物保存于-20℃并安排后续试验。

• DNA末端修复/加dA尾试剂（WH0209)
  
• adapter快速连接试剂（WH0201）
  
• NGS文库富集试剂（WH0210)

• 在开始实验前，明确核酸的浓度及纯度至关重要，推荐DNA上样量为1ng～1μg。DNA需溶解于以下溶液中：去离子水、10mM Tris、Buffer EB或LoTE（0.1×TE）等。
  注意：
  
  • 确定上样DNA浓度至关重要，尤其在上样量低于100ng时。推荐使用Qubit、Picogreen或者其他染料法对DNA浓度进行准确定量。
    
  • 请确认DNA溶液中不含阳离子及螯合剂。如果DNA溶解于1×TE或不确定DNA溶液中的EDTA浓度，使用Agencourt AMPure XP磁珠进行纯化。
  
  
• 将各试剂置于冰上，5×Frag Enzyme Mix融化后用手指后轻弹混匀，不要涡旋。其余试剂可短暂涡旋混匀。

• 照下表设置PCR仪反应程序。开启热盖，热盖温度设置为70℃。
  

  操作步骤	温度	时间
  1	4℃	1min
  2	32℃	3～22min*
  3	65℃	30min
  4	4℃	保持

  
  注^*：确切的片段化反应时间需要根据DNA的实际上样量进行优化。下表1中列出100ng DNA片段化所需的时间。用户可以依据此时间进行调整。调整过程中，我们推荐额外设置一个反应时间延长3min以及一个缩短3min的对照，这样有助于确定切割至所需片段大小时所需要的准确反应时间。
  表1：片段化时间选择表
  

  	片段化时间（min)（32℃)
  DNA主峰大小	200bp	300bp	400bp	500bp
  100ngDNA上样量	15	8	5	3.5

  
  
  图1.100ng大肠杆菌基因组DNA片段化图谱（3～22min）
  
• 在薄壁管中按下表配制反应体系，冰上操作，各组分加入后，请轻柔吸打混匀，注意不要涡旋。
  

  成分	用量（μl)
  10×Frag Buffer	5
  DNA样本	X
  Nuclease-Free ddH2O	（35-X)*
  总体积	40

  
  注^*：对于多个反应，请计算所需试剂的总体系并在此基础上增加体系10%，以避免因溶液转移过程中挂壁损失而造成分装反应数不足的问题。
  
• 向薄壁管中加入10μL 5×Frag Enzyme Mix，轻柔吹打6～8次，不要涡旋。
  注：此过程需一直处于冰浴中进行。
  
• 将薄壁管短暂离心，收集溶液至管底后，立即转移至4℃预冷的PCR仪中，启动步骤1中的反应程序。
  
• 当反应程序结束，PCR仪温度降至4℃后，将薄壁管从PCR仪中取出并置冰上。立即进行下一步实验操作。